破骨細胞的傳代

大鼠周圍血單個核細胞經(jīng)RANKL、M－CSF 誘導(dǎo)培養(yǎng)2周，形成大量貼壁的多核破骨細胞后，從培養(yǎng)箱中取出，將培養(yǎng)液吸凈，

加入37 ℃預(yù)溫的D－Hank's液，沖洗2次，再滴加足量的0.25％胰蛋白酶液，使其覆蓋整個底面，置于37 ℃培養(yǎng)箱中消化5min后取出，

震蕩1min左右，在倒置相差顯微鏡下觀察，當(dāng)大部分細胞收縮懸起后，加入α－MEM培養(yǎng)液終止消化，用吸管反復(fù)抽吸吹打，

將細胞混勻后移入15ml離心管，2000r／min，離心5min，去上清，用含RANKL、M－CSF的α－MEM培養(yǎng)液重懸細胞， 

調(diào)整濃度至1×105個／ml，接種細胞至6孔培養(yǎng)板與直徑35mm 培養(yǎng)皿中。同時對消化與貼壁過程作活細胞成像觀察，3d后作TRAP染色。